使用膜再生液可以对同一张膜进行多次Western Blot检测。在室温条件下,将用过的膜浸泡在膜 再生液10-60 分钟,可在不影响抗原蛋白的情况下清除膜上结合的抗体。随后,可以使用不同的抗体进行下一轮Western Blot实验。适宜从少量样品多次检测不同蛋白质。即使样品量并不匮乏,采用这一策略多次检测同一张膜上的蛋白,能省去给药处理、蛋白电泳和膜转移等耗费性步骤。而且可以消除重新上样而带来的误差,使可比性更强。
Western Blot 膜再生液特点是:无毒有酸味无害,室温下使用,室温下保存;可对同一张膜进行 5 次以上的 Western Blot 检测。
本产品由由TRIS、SDS和巯基乙醇等组成。适用于清除硝酸纤维素膜或 PVDF 膜上结合的抗体,不影响抗原蛋白。
1:将膜充分浸泡于适当体积的再生液中,室温洗脱 10-30分钟,时间长短应该参考注意事项进行优化,洗脱某些抗体需较长时间,更有长达60分钟之久,如果室温洗脱效果不好,可将膜再生液加热至50度,在50度水浴条件下进行洗脱。
2:取出膜,用洗涤液(如TBST 等)漂洗两次。
3:此时膜上抗体已除去,可重新封闭后再加入另一种抗体进行检测。