引物,是指在核苷酸聚合作用起始时,刺激合成的,一种具有特定核苷酸序列的大分子,与反应物以氢键形式连接,这样的分子称为引物。引物通常是人工合成的两段寡核苷酸序列,一个引物与靶区域一端的一条DNA模板链互补,另一个引物与靶区域另一端的另一条DNA模板链互补,其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点,核酸聚合酶可由其3'端开始合成新的核酸链。体外人工设计的引物被广泛用于聚合酶链反应、测序和探针合成等。
产品使用说明:
1.Oligo参数
本产品以干粉的形式提供,同时以液体形式赠送一管。
本产品是通过紫外分光光度计在260mm波长下定量的,10D值单位的干粉oligo质量约为33ug,
其分子量计算参考以下公式:MW=(#A×313.21)+(#G×329.18)+(#C×289.18)+(#T×304.20)+
(#Mix×324.50)+(#I×314.19)+(#U×290.17)-61.96(#A即A碱基的个数,其余类同).nmol
33000/MW uL=330000/MW。
Tm计算公式为:碱基数>=15 Tm=59.9+(0.41*(#G+#C)*100-500)/碱基总数
0<碱基数<15 Tm=4*(#G+#C+#Mix/2)+2*(#A+#T+#Mix/2)
2.Olgo的稀释和保存
使用真空冷冻于燥的Oligo呈薄膜或粉未状附着在离心管壁上,由于静电或气流的冲击,极易引起飞扬造成Oligo损失,因此稀释前请将离心管离心数秒,使oligo集在管底并小心开启管盖,在加入适量ddH2O成TE缓冲液(10 mM Tris-HCI,0.0 ImM EDTA,pH8.0),盖好管盖,涡旋振荡混匀使其充分溶解.Oigo产品请置于-20℃保存。干粉状态至少可稳定保存1年,溶液状态可稳定保存6个月以上。
3.Olgo的使用及检测
A如无特殊修饰,本公司提供的Oligo5’和3’端均为羟基,可直接用于PCR。
B退火的实验流程; Oligonucleotide I. Oligonucleotide2分别加水至20-100uL;,充分溶解
匀后,等体积混合,充分混匀,加1/10体积的10x Annealing Buffer (100mM Tris-HiCI,1M
NaCl,0.1 mM EDTA,pH8.0),充分混匀,将Oligo混合溶液放在95℃孵育5min,随后取出,室温
下冷却1~2h即可;退火的产物请于-20℃保存。
C其他使用可来电咨询。
D若对oligo产品进行电泳分析,请使用16%的PAGE胶(7M尿素的聚丙烯酰胺凝胶电泳和
1 xTBE Buffer)进行检测,样品上样前必须加饱和尿素或甲酰胺处理,电泳结束后置于硅胶荧光
上,在紫外灯下会看到明亮清晰的黑色条带,若无条件,可在紫外分光光计度对OD值进行检查。
4.售后说明
如您在收到oligo产品后一个月之内未提出异议,我们将视本制品为优良产品不再受
投诉事宜。如确认质量问题,我司将安排免费重新合成或赔偿不超过oigo合成本身的价值。